超氧化物歧化酶SOD

刘佳霖

[摘 要]超氧化物歧化酶（SOD）是一种广泛存在于动物、植物和好氧微生物细胞中的金属酶，能够催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应，平衡机体代谢过程中产生的过多自由基，减轻或消除自由基对机体的危害，具有抗衰老、免疫调节、抑制肿瘤、调节血脂、抗辐射、消炎和美容等功效。SOD是当前生物学、医学以及化学研究领域中世界级的课题之一。本文通过对白菜超氧化物歧化酶（SOD）的抽提缓冲液pH值，抽提体积，抽提时间，热处理的温度和时间进行正交实验，探讨白菜SOD的最佳提取条件。结果表明：抽提缓冲液的pH值为7.8，抽提液固比为3∶1，抽提时间为2h，热处理温度为55℃，热处理时间为15min时，得到白菜SOD的相对最大酶活力。

[关键词]白菜；超氧化物歧化酶；提取条件

中图分类号：TU2023 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2017）21-0085-01

一、材料与方法

取大量新鲜白菜叶，去除其老叶、黄叶，叶梗，洗净晾干后，切成小块，放入冰箱中，待用。

分别取定量白菜叶进行SOD液固比，提取时间，提取温度，提取磷酸缓冲液试验，用邻苯三酚自氧化法分别测定其酶活性。

二、结果与分析

2.1 SOD提取液固比的确定

采用不同比例的物料量与浸提剂，浸提SOD。随浸提剂用量的增加，SOD酶活力呈上升状态，在液固比为3∶1（浸提剂体积/mL∶白菜质量/g，下同）时提取得到的酶活力已接近最大值，再增加浸提倍数，酶活力增加微小，并为以后的硫酸铵分级盐析和浓缩带来不便，同时考虑到生产成本等因素的限制，根据试验结果以3∶1的液固比较适宜。试验结果见图1，表1。

2.2 SOD提取时间的确定

取最佳液固比（15mL蒸馏水∶5g白菜叶），在4℃冰箱中各自浸提1h、1.5h、2h、2.5h、3h進行试验，测得吸光值随时间变化见图2-2，SOD极易溶于蒸馏水，在被试验的几小时内其吸光值一直增大，当浸提时间t为2～3h时，其吸光值变化曲线表现更平稳，我们将其吸光值变化最小的时间段作为提取的最佳时间，故本试验选择2h为提取SOD的最佳时间（图2）。

2.3 SOD提取温度的确定

采用液固比为15mL蒸馏水∶5g白菜叶，冰浴条件下充分研磨后，转移到试管中，在不同温度下浸提SOD，将提取液稀释后测得其吸光值，其吸收曲线如图3。

从图中可以看出，SOD提取效率以55℃～65℃较为合适，在这一温度下，能在较短的时间内达到最大提取率，温度过高或过低都不理想。当温度超过65℃时，SOD酶活力明显降低。而且在55℃～65℃温度下，浸提15min后，SOD酶活力没有明显变化。因此考虑到能源及设备方面等因素，实验中SOD的最佳提取温度为55℃，最佳提取时间为15min。

2.4 SOD提取缓冲液pH的确定

SOD在不同酸度下的酶活力变化见图4。

用不同浓度的磷酸缓冲液浸提，随着pH值的增大，SOD酶活力逐渐增大，当pH为7.8时其酶活力最大。因此，在相同条件下（时间/温度/物料比），pH为7.8的提取剂更能促进SOD溶解，因此SOD提取缓冲液的最佳pH为7.8。

三、结论

SOD提取的最佳液固比为3∶1。

当浸提时间t为2～3h时，其吸光值变化曲线表现更平稳，我们将其吸光值变化最小的时间段作为提取的最佳时间，故本试验选择2h为提取SOD的最佳时间。

SOD在55℃～65℃时提取效率较高，且能在较短的时间内达到最大提取率，温度过高或过低都不理想。当温度超过65℃时，SOD酶活力明显降低。而且在55℃～65℃温度下，浸提15min后，SOD酶活力没有明显变化。因此考虑到能源及设备方面等因素，实验中SOD的最佳提取温度为55℃，最佳提取时间为15min。

磷酸缓冲液可提高SOD浸取效能，增加其稳定性，减少杂质，因此实际操作中常采用pH7.8的磷酸缓冲液来浸提SOD。

参考文献

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