孙真 闫红贺
[摘 要]目的：建立消咳喘片中金丝桃苷的含量测定方法。方法：采用HypersilC18（4. 6 mm×250 mm，5mm）色谱柱，甲醇B0. 5%的磷酸水溶液（45：55，三乙胺调pH至3）为流动相，流速为0. 8mL/min，柱温为30℃，检测波长为355 nm。结果：金丝桃苷在0. 12～1. 92Lg范围内线性关系良好，平均回收率为100. 56%，RSD=2. 10%。结论：所建立的方法准确、灵敏、重现性好，可用于消咳喘片的质量控制。
[关键词]消咳喘片；金丝桃苷；HPLC；含量测定
中图分类号：U443 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）04-0344-01
提取满山红中所含有的挥发油以及黄铜，经过加工就可以制成消咳喘片。该消咳喘片主要的用途就是针对气管炎进行治疗，并且对于支气管炎也有很好疗效。充分的对消咳喘片中所含有的化学物质进行详尽的分析，同时对该药物所具有药用价值进行充分的解读，就能够从根本上了解到，在消咳喘片中，金丝桃苷能够起到止咳的效用，其是消咳喘片发挥药理活性的主要构成成分之一。而很多的研究人员也意识到金丝桃苷应用的重要性，针对消咳喘片中的金丝桃苷也采取了相应的方法进行测定，但是就目前来说，还没有得出更加准确的金丝桃苷含量测定方法。本文就主要针对消咳喘片中的金丝桃苷含量测定进行了简要的分析，以实验的方式来得出理想化的金丝桃苷含量测定方法。
1、实验材料
LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，UV-260型紫外分光光度计，QK-100型超声波清洗器，TG328B分析天平。金丝桃苷标准品，消咳喘片。甲醇、磷酸、三乙胺为分析纯。
2、方法与结果
2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：Hypersil C18柱（4. 6 mm×250 mm， 5mm）。流动相：甲醇B0. 5%的磷酸水溶液（45：55，三乙胺调pH至3）。流速： 0. 8 mL/min。柱温：30℃。检测波长： 355 nm。进样体积： 20mm。在上述色谱条件下，理论板数按金丝桃苷计大于5 000，分离度大于1. 5，拖尾因子在0. 95～1. 05之间。
2.2溶液的制备
2.2.1针对对照品溶液进行制备的时候，需要先合理的利用称量装置对金丝桃苷进行准确的称量，称量的标准金丝桃苷量为3.0g，并将精确称量的金丝桃苷放置到已经准备好的量瓶中，而所选取的量瓶容量为25mL。同时在量瓶中滴入甲醇，充分的将金丝桃苷与甲醇融合，稀释到规定刻度的时候，即可停止。
2.2.2针对样品溶液进行制备的过程中，选取适量的消咳喘片，利用精密的仪器称量出10片，然后将所选择的消咳喘片进行研磨处理，称取0.5g的粉末，将其置于选定的量瓶中，所选定的量瓶定为25mL，同时在量瓶中加入甲醇，所加入的甲醇要利用超声技术进行提纯，在15min中，将获取到的甲醇与量瓶中的消咳喘片粉末融合，充分摇匀后，进行过滤处理，这样就可以获取到样品溶液。
2.3专属性试验
严格的依照消咳喘片处方来对对照品溶液进行配置，并且对羧甲基淀粉钠进行精确的称量，称量的标准量为46mg，同时称量5mg的硬脂酸镁，并且根据相应的溶液配置步骤来进行配置处理，选用合适的配置方法，来进行不含消咳喘浸膏的阴性对照品溶液的配制，针对样品进行分析，就可以充分的了解到，如果在13.418min左右并没有出现吸收峰，那么久表明，这样的实验方法具有优质的专属性质。
2.4标准曲线的绘制
分别吸取金丝桃苷对照品溶液0. 5、1、2、4、6、8 mL于10 mL的量瓶中，稀释至刻度。摇匀，各取20mL进样，测定峰面积，进行色谱分析。以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程为Y=3 063 698×10-7X+4 322×10-3，r=0. 999 9（n=6）。表明金丝桃苷的进样量在0. 12～1. 92mg范围内呈良好的线性关系。
2.5精密度试验
精密吸取对照品溶液2mL于10mL的量瓶中，稀释至刻度。摇匀，重复进样6次，每次20LL，测定峰面积，进行分析。RSD小于2%，表明此方法精密度好。
2.6加样回收率试验
精密称取一定量的金丝桃苷对照品，分别加入到已知含量的样品溶液中，分别以高、中、低三个浓度测定加样回收率。试验结果见表1。回收率在95% ～105%之间，平均回收率为100. 56%，RSD=2. 10%。表明此方法准确度较高。
2.7样品含量测定
按样品制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取滤液2 mL于10 mL的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，依色谱条件进样20mL，测定峰面积，进行色谱分析，采用外标法计算样品中金丝桃苷的含量。共测定3批样品。结果见表2。
3、讨论
要想能够精确的获取到最大的吸收波长，就需要利用所配置的金丝桃苷对照品溶液以及样品溶液进行合理的对比试验研究。充分的利用紫外分光光度计来对所选取的对照品溶液以及样品溶液进行波长的扫描，在扫描中获取最大的吸收波长。根据试验的结果就可以充分的了解到，配置的金丝桃苷对照品溶液其最大的吸收波长出现在259nm以及355nm波段。而本文在针对消咳喘片中的金丝桃苷含量进行确定的过程中，所选取的实验波长为355nm。
满山红中最重要的成分就是金丝桃苷，金丝桃苷能够在甲醇以及乙醇中充分的溶解，而本文的实验，采用的溶解溶剂主要就是甲醇，在进行样品溶液制备的过程中，主要是利用超声提取技术来对甲醇进行15min的超声处理，这样的处理方法相对来说较为简单，在提取上也较为完整。就本文的实验来看，所选用的甲醇均为具有较为明显流动相的甲醇。而且这些甲醇中， 所含有的水量为40：60，而甲醇中含有冰醋酸水溶液，比例为43：57，冰醋酸水溶液与磷酸水溶液之间的比例为45：55，根据比例进行分析就可以充分的了解到，如果选用的甲醇中冰醋酸水溶液比例为43：57，那么这种甲醇的色谱峰就会较宽，而且表现出来的峰形也并不完全。如果选用的甲醇中磷酸水溶液的比例为45：55，并且三乙胺的PH值上升到3，甲醇溶液所表现出来的峰形则较为狭窄，能够起到良好的分离效果。
参考文献
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