HPLC法测定养血当归胶囊中阿魏酸
汝玉霞 李尚晏
[摘 要]目的：研究驻车丸中阿魏酸的含量测定方法。方法：用碱液回流提取，乙醚萃取4次；以Kromasil C18 （4.6mm×250mm，5μ） 。以甲醇：0.2%磷酸溶液（30：70）为流动相；检测波长为313nm；柱温30℃。结果：阴性样品无干扰，方法专属性良好；在82.0～5.1μg/ml范围内，阿魏酸的峰面积与进样量有良好的线性关系，R=0.9999；平均回收率为101.2% ，RSD=1.23%；供试品溶液在24小时内稳定性良好。结论：方法快速，简便准确，可用于该制剂的稳定性考察及成品质量控制。
[关键词]高效液相色谱法；驻车丸；含量测定
中图分类号：R231.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0359-01
驻车丸方剂源自唐《千金要方》。并采用现代制药技术，主治久痢伤阴，便血，或有滑脱不禁，或泻下不畅，舌红少苔，脉细数者。本文建立了高效液相色谱法的外标法对驻车丸中阿魏酸进行含量测定，利用HPLC法对本品中阿魏酸的含量测定进行了方法学考察。经方法学研究表明，该测定方法的专属性、线性、精密度、重复性、回收率均良好。
1.仪器与试药
对照品：阿魏酸对照品 批号110773-201313
仪 器：型号：LC-20AT，配备LC工作站
色谱柱：Kromasil C18 （4.6mm×250mm，5μ）
试 药：甲醇为色谱纯，其他为分析纯。
2.方法
色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2%磷酸（30：70）为流动相；检测波长为313nm。柱温30℃。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1000。
对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品10mg，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含阿魏酸0.02mg）。
供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约0.5g，沾水后置烧瓶中，加入0.05mol/L氢氧化钠试液60ml，水浴回流6小时，取出放置至室温，滤过，用0.05mol/L氢氧化钠试液洗涤烧瓶及供试品，洗涤液滤过，合并上述滤液及洗涤液，置分液漏斗中，加稀盐酸调pH至1，用乙醚萃取4次（30、20、20、20ml），合并乙醚液，加无水硫酸钠脱水后回收乙醚，残渣加热水使充分溶解，滤入10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取通过微孔滤膜的对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.阴性干扰试验
取不含当归的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性溶液。精密吸取供试品溶液，阴性溶液，对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图。
由色谱图提示，在对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性溶液在此峰位无吸收，对本制剂中阿魏酸含量测定无干扰，方法专属性良好。
4.线性试验
精密称取阿魏酸对照品10.50mg，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取0.5 ml、1ml、2 ml、4ml、6ml、8ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，线性试验结果见表1。
以阿魏酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做回归曲线，回归方程为，y=29398x+61481；R=0.9998，对阿魏酸在5.25～84.0μg/ml浓度范围内线性关系良好。
5.精密度试验
取阿魏酸对照品10.50mg，置100ml量瓶中，用水稀释刻度。精密吸取2ml，置10ml量瓶中，用水稀释刻度，即得。精密量取上述两种溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。（见表2）
以上数据表明，精密度良好。
6.重复性试验
取驻车丸样品，照含量测定项下方法，在同一实验室由同一人进行含量测定，样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定绘制色谱图。
由结果可见，测定方法重复性良好。
7.回收率试验
精密称取供试品0.25g，方法同前，再精密称取一定量的阿魏酸对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定绘制色谱图。
由结果可见，回收率在95%～105%之间，RSD值为1.31%。测定方法回收率良好。
8.供试品溶液稳定性试验
取驻车丸样品，色谱条件同前，取本品0.5004 g，分别于0、2、4、6、8、24小时，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录峰面积，进行测定。
结果表明，室温放置24小时，峰面积未发生显著变化，含量测定应在24小时完成.
3 小结与讨论
取阿魏酸对照品适量，用流动相溶液溶解，在200～400 nm波长范围内扫描，结果阿魏酸在313 nm处有最大吸收，故选313nm作为检测波长。
在试验过程中，考察多种流动相，最后选用的流动相：甲醇—0.1%磷酸溶液（85：15）分离效果较好。实验中还考察了不同柱温对色谱分离效果的影响，最后选用柱温为30℃分离效果好。因此确定以柱温为30℃。
本课题采用高效液相色谱法测定驻车丸中阿魏酸的含量，具有操作简便，结果准确可靠，重现性好的优点。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典.中国医药科技出版社.2015年版，一部.
